A capacidade de ligação da concanavalina A (Con A) a regiões condensadas de eucromatina e heterocromatina foi investigada em núcleos de eritrócito de frango (CEN), hepatócitos de rato, células meristemáticas de Zea mays mays e em cromossomos politênicos de Drosophila melanogaster após hidrólise com HCl 4 N para determinar a ocorrência de ligação preferencial em bandas e heterocromatina. A variação da massa seca foi investigada em CEN por microscopia de interferência, e reações de Feulgen e Con A foram empregadas para todos os materiais para correlacionar os loci de ambas reações. As quantificações e verificações topológicas foram levadas a efeito por análise de imagens (citometria de alta performance). Foi observado que a hidrólise por HCl 4 N causou uma importante perda de massa seca em CEN, permanecendo um nível correspondente ao conteúdo médio de massa seca de DNA. Neste material a ligação com Con A foi restrita ao envelope nuclear, reforçando a idéia da ausência da matriz nuclear nessas células. Os demais tipos celulares exibiram áreas reativas de cromatina condensada e heterocromatina. Este fato permite especular o papel desempenhado por proteínas Con A-positivas no mecanismo de condensação cromatínica. Esta estrutura glicoprotéica contribuiria para uma maior estabilidade físico-química da cromatina condensada, especificamente da heterocromatina, e também para suas propriedades reológicas.

The binding capacity of concanavalin A (Con A) to condensed euchromatin and heterochromatin was investigated in chicken erythrocyte nuclei (CEN), mouse liver cells, Zea mays mays meristematic cells and Drosophila melanogaster polytene chromosomes after 4 N HCl hydrolysis to determine whether binding was preferentially occurring in bands and heterochromatin. Dry mass (DM) variation was investigated in CEN by interference microscopy. Feulgen and Con A reactions were employed for all materials to correlate the loci of the two reactions. Quantifications and topological verifications were carried out by video image analysis (high performance cytometry). It was observed that 4 N HCl hydrolysis caused an important DM loss in CEN leaving a level corresponding to the average DNA DM content. In this material, Con A binding was restricted to the nuclear envelope, which reinforces the idea of the absence of a nuclear matrix in these cells. The other cell types exhibited a correspondence of Feulgen-positive and Con A-reactive areas. The Con A reaction was highly positive in the condensed chromatin areas and heterochromatin. This fact led us to speculate that Con A-positive proteins may play a role in the chromatin condensation mechanism, endowing this structure with physico-chemical stability towards acid hydrolysis and contributing to its rheological properties.

Plantas representam um sistema muito rentável para a produção de proteínas de valor elevado. Vacinas de baixo custo que podem ser administradas com facilidade são muito solicitadas no mercado mundial, especialmente nas regiões menos desenvolvidas. A produção de vacinas em plantas cultivadas em agricultura local é uma área bastante promissora para solucionar esse problema. A expressão de peptídeos antigênicos nas partes comestíveis destas plantas pode resultar na produção das vacinas ativas e edulas. As duas principais estratégias são: i) a expressão de antígenos em plantas transgênicas e ii) a produção de peptídeos antigênicos na superfície de vírus vegetais que serão usados para infectar plantas hospedeiras. Esta revisão considera os dados experimentais e os primeiros resultados utilizando ambas estratégias, e discute as possibilidades e os problemas desta nova tecnologia

Plants present a cost effective production system for high value proteins. There is an increasing world demand for cheap vaccines that can be readily administered to the population, especially in economically less developed regions. A promising concept is the production of vaccines in plants that could be grown locally. Expression of antigenic peptides in the palatable parts of plants can lead to the production of edible active vaccines. Two major strategies are: i) to express antigens in transgenic plants, and ii) to produce antigenic peptides on the surface of plant viruses that could be used to infect host plants. This review considers the experimental data and early results for both strategies, and discusses the potential and problems of this new technology

Hb Köln resulta da substituição do aminoácido valina por metionina na posição 98 da cadeia da hemoglobina. Embora seja a mais freqüente das hemoglobinas instáveis, possui poucas características que permitem distinguíla sem a realização de análise estrutural da molécula. Com o objetivo de desenvolver um procedimento alternativo à análise protéica, este trabalho descreve a identificação da Hb Köln através de análise de DNA. Uma paciente branca, sexo feminino, 4 anos de idade, com icterícia desde o nascimento, foi analisada, apresentando uma banda anômala entre A2 e S em eletroforese em acetato de celulose, e migração eletroforética semelhante a Hb C em gel de agar. Os testes de instabilidade térmica e de precipitação pelo isopropanol foram positivos e foram observados corpúsculos de Heinz no sangue periférico. Os três exons do gene da globina foram seqüenciados e uma transição de G <FONT FACE="Symbol">®</font> A foi identificada na primeira posição do codon 98. Essa alteração não cria ou abole nenhum sítio conhecido de enzima de restrição. Desta forma, a confirmação da mutação foi levada a efeito através de hibridização com oligonucleotídeos aleloespecíficos, o que permitiu o estabelecimento de um método simples e rápido de identificação de novos casos quando os dados clínicos e o padrão hematológico e eletroforético sugerem Hb Köln.

Hb Köln was identified by DNA analysis in a Brazilian patient. A four-year old Brazilian female, with jaundice since birth, presented an abnormal band, between A2 and S, in hemoglobin electrophoresis on a cellulose acetate membrane, and a band with electrophoretic migration similar to Hb C on agar gel. Thermic instability and isopropanol precipitation tests were positive. Heinz bodies were observed in the patient’s peripheral blood. Sequencing of the three exons of the <FONT FACE="Symbol">b</font> globin gene detected a transition from G to A in the first position of codon 98. This alteration does not create or abolish any known restriction site. In this case, confirmation of the mutation was accomplished by allele-specific oligonucleotide hybridization, which is a simple and fast identification method when the clinical data and hematological and electrophoretic patterns are suggestive of Hb Köln.

É bem estabelecido que virtualmente todos os tecidos das larvas de anfíbios são altamente sensíveis à ação mutuamente antagonista dos hormônios tireoideanos (TH) e prolactina (PRL). Porém, não é sabido se os tecidos do anfíbio adulto respondem de uma forma semelhante a estes hormônios. Em um trabalho anterior, nós demonstramos que baixas doses de triiodotironina (T3) potenciam rapidamente e com alta intensidade a ativação pelo estrogênio (E2) de genes silenciosos da vitelogenina (Vit), bem como a autoindução de transcritos de receptores para estrogênio (ER) em culturas primárias de hepatócitos de Xenopus adultos. Esta resposta para o T3 é acompanhada pela ativação da transcrição do mRNA de receptores <FONT FACE="Symbol">b</FONT> para o hormônio tireoideano (TR<FONT FACE="Symbol">b</FONT>). Através das técnicas de Northern blotting e "RNase protection assay", nós agora estamos mostrando que prolactina ovina adicionada por 12 h, juntamente com 2 x 10-9 M de T3, em culturas primárias de hepatócitos adultos de Xenopus bloqueia completamente a ação de T3 na potenciação da indução de mRNA da Vit pelo hormônio E2. PRL também aboliu a autoregulação positiva do mRNA para TR<FONT FACE="Symbol">b</FONT> e a ativação cruzada da autoindução do mRNA do ER. Assim, nós estamos mostrando pela primeira vez que a ação anti-TH da PRL, manifestada em girinos de Xenopus durante a metamorfose, é mantida no fígado adulto, sugerindo que esta ação mutuamente antagonista dos dois hormônios pode ser desempenhada por mecanismos moleculares semelhantes nos tecidos de ambos os estágios do anfíbio.

It is well known that virtually every tissue of the amphibian larvae is highly sensitive to the mutually antagonistic actions of thyroid hormone (TH) and prolactin (PRL), but it is not known if adult amphibian tissues respond similarly to these two hormones. We have previously shown that very low doses of triiodothyronine (T3) rapidly and strongly potentiate the activation of silent vitellogenin (Vit) genes by estrogen (E2) and the autoinduction of estrogen receptor (ER) transcripts in primary cultures of adult Xenopus hepatocytes. This response to T3 is accompanied by the upregulation of thyroid hormone receptor <FONT FACE="Symbol">b</FONT> (TR<FONT FACE="Symbol">b</FONT>) mRNA. Using Northern blot and RNase protection assays, we now show that ovine PRL added for 12 h along with 2 x 10-9 M T3 will completely prevent potentiation of E2 induction of Vit mRNA in primary cultures of adult Xenopus hepatocytes. PRL also abolished the auto-upregulation of TR<FONT FACE="Symbol">b</FONT> mRNA and the cross-activation of autoinduction of ER mRNA. Thus, we show for the first time that the anti-TH action of PRL that is manifested in Xenopus tadpole tissues during metamorphosis is retained in adult liver, and suggest that the mutually antagonistic actions of the two hormones may be brought about by similar molecular mechanisms in larval and adult amphibian tissues

Plantas de Stylosanthes scabra, um poliplóide da família das leguminosas, tolerante à seca e adaptado a solos ácidos, foram regeneradas a partir da cultura de calos oriundos de folha. Um total de 168 regenerantes foram cultivados em vasos de Leonard em um experimento inteiramente casualizado. Fixação de N2 e desenvolvimento vegetativo foram indiretamente avaliados por peso seco da parte aérea, peso seco da raiz, conteúdo de N e atividade de redução de acetileno. Os resultados mostraram maior variação nos regenerantes que nas plantas não submetidas à cultura de tecidos usadas como controles. Diferenças significativas foram encontradas para todos os caracteres associados à fixação de N2.

Plants were regenerated from leaf-derived callus culture of Stylosanthes scabra, a polyploid legume tolerant to drought and adapted to acid soils. A total of 168 regenerants were planted out in Leonard jars in a complete randomized design. Nitrogen fixation and vegetative growth were indirectly evaluated by shoot dry weight, root dry weight, shoot N content and acetylene reduction activity. The results showed higher variation in the regenerants than in controls not submitted to tissue culture. Significant differences were found for all nitrogen fixation related-traits

Cinco polimorfismos protéicos do leite bovino foram estudados em raças zebuínas criadas no Brasil através de eletroforese horizontal em gel de amido contendo uréia e 2-mercaptoetanol, utilizando tampão básico e ácido. As freqüências alélicas nos locos <FONT FACE="Symbol">a</FONT>-La, <FONT FACE="Symbol">b</FONT>-Lg, <FONT FACE="Symbol">a</FONT>S1-Cn, <FONT FACE="Symbol">b</FONT>-Cn e <FONT FACE="Symbol">k</FONT>-Cn foram estimadas em seis rebanhos da raça Gir (N = 283), seis da raça Guzerá (N = 205), um da raça Nelore (N = 17) e um da raça Sindi (N = 22), todos provenientes dos Estados de São Paulo e Minas Gerais, Brasil. As freqüências genotípicas observadas para cada loco em cada raça estudada encontram-se próximas às esperadas supondo equilíbrio genético, evidenciando ausência de coeficientes elevados de endogamia dentro de raças. O valor estimado de FST indica significante diferenciação genética entre as raças. Entretanto, os rebanhos analisados das raças Gir e Guzerá não constituem grupos geneticamente homogêneos. Estimativas de distância genética entre as raças zebuínas estudadas e a raça Holandesa, tomada como referência de raça taurina, mostram uma nítida diferenciação entre estes dois grupos raciais

Five bovine milk protein polymorphisms were studied in Zebuine cattle raised in Brazil, through horizontal electrophoresis on starch gel containing urea and 2-mercaptoethanol, using basic and acidic buffer systems. Allelic frequencies for <FONT FACE="Symbol">a</FONT>-La, <FONT FACE="Symbol">b</FONT>-Lg, <FONT FACE="Symbol">a</FONT>S1-Cn, <FONT FACE="Symbol">b</FONT>-Cn and <FONT FACE="Symbol">k</FONT>-Cn loci were estimated in six Gyr herds (N = 283), six Guzerat herds (N = 205), one Nelore herd (N = 17) and one Sindi herd (N = 22), all from São Paulo or Minas Gerais State, Brazil. Genotypic frequencies observed for each locus and breed studied are in accordance with the assumption of genetic equilibrium, demonstrating absence of high inbreeding levels for the breeds tested. The FST value found indicated significant genetic differentiation among breeds; however, the Gyr and Guzerat herds showed significantly different gene frequencies. Genetic distance estimates among zebuine breeds studied and the Holstein breed, taken as a reference for a taurine breed, showed strong differences between these two racial groups

Foram estudados pela primeira vez os cariótipos de duas espécies do gênero Aratinga, A. guarouba e A. acuticaudata. As metáfases foram obtidas utilizando-se o método de cultura de curta duração de polpa de penas jovens. Estes cariótipos foram comparados com outros do mesmo gênero. Interpretações cariológicas na ordem Psittaciformes são discutidas.

The karyotypes of two species of Psittacidae of the genus Aratinga, Aratinga guarouba and A. acuticaudata were studied for the first time. The metaphases were obtained using a short term culture of feather pulp. These karyotypes are compared with others of the genus and their karyological relationships in the Psittaciformes are discussed

Oito subespécies do gênero Saguinus (S. f. fuscicollis, S. f. weddelli, S. b. bicolor, S. b. martinsi, S. m. mystax, S. i. imperator, S. m. midas e S. m. niger) foram estudadas citogeneticamente, das quais cinco (S. f. fuscicollis, S. f. weddelli, S. b. martinsi, S. m. mystax e S. i. imperator) tiveram seu cariótipo descrito pela primeira vez neste estudo. Os cariótipos foram analisados por coloração convencional, pelos padrões de bandas G, C e NOR, e pelo método de bandeamento sequencial G/C. Todos os espécimens mostraram o mesmo número diplóide (2n = 46 cromossomos) e os padrões de bandas G, C e NOR foram muito similares entre as subespécies, diferindo apenas na quantidade e distribuição de heterocromatina constitutiva de alguns autossomos. Heterocromatina constitutiva presente na região telomérica de alguns cromossomos foi observada apenas em S. f. fuscicollis e S. f. weddelli. O cromossomo X foi igual em todas subespécies, porém, o cromossomo Y diferiu em morfologia e tamanho. Quimerismo cromossômico XX/XY foi verificado em todas as subespécies.

Eight subspecies from the genus Saguinus (S. fuscicollis fuscicollis, S. fuscicollis weddelli, S. bicolor bicolor, S. bicolor martinsi, S. mystax mystax, S. imperator imperator, S. midas midas, and S. midas niger) were studied. Five of them (S. f. fuscicollis, S. f. weddelli, S. b. martinsi, S. m. mystax and S. i. imperator) had their karyotypes described for the first time. Conventional coloration, banding patterns G, C and NOR, and G/C sequential banding tecniques were used. All samples showed the same diploid number (2n = 46). The patterns of the G, C and NOR bands were very similar with little differences in the quantity and constitutive heterochromatin distribution of the autosomes. Constitutive heterochromatin was observed only in telomeric regions of some chromosomes of S. f. fuscicollis and S. f. weddelli. The X chromosome was the same in all subspecies, but chromosome Y differed in size and morphology. XX/XY chimerism was verified in all subspecies

Alguns tópicos básicos relativos à extração de informações texturais e geométricas de núcleos celulares, bem como a descrição e a categorização da supraorganização cromatínica e conseqüente classificação de fenótipos nucleares, são aqui apresentados.

Some basic topics concerned with the extraction of textural and geometric information from cell nucleus images as well as description and characterization of chromatin supraorganization and consequent classification of nuclear phenotypes are presented.

Realizamos análises citogenéticas e moleculares em 55 famílias com a mutação da síndrome do cromossomo X frágil, loco FMR-1 (318 indivíduos e 15 amostras de vilosidade coriônica). Foram estudados 129 indivíduos do sexo masculino, 75 com retardo mental e 54 normais. Entre os 54 normais, 11 eram portadores da pré-mutação e nenhum apresentou o sítio frágil. Foram detectados 73 portadores da mutação completa e 18% eram mosaicos, ou seja, apresentavam também a pré-mutação. Todos expressaram o sítio frágil em pelo menos um dos sistemas de indução utilizados. O tamanho da expansão de trinucleotídeos CGG (<FONT FACE="Symbol">D</FONT>) e a freqüência de manifestação do sítio frágil apresentaram correlação positiva. Entre as 153 mulheres normais, 85 eram portadoras da pré-mutação e 15 da mutação completa. A freqüência de expressão do fra(X) foi zero ou extremamente baixa entre as pré-mutadas e essa freqüência não diferiu da expressão das não portadoras da mutação. Portanto, a análise citogenética é ineficaz na detecção de indivíduos pré-mutados, homens ou mulheres. Entre as 51 mulheres com a mutação completa, 70% manifestaram algum grau de comprometimento mental. Encontramos também correlação entre o <FONT FACE="Symbol">D</FONT> e a freqüência de expressão do fra(X) nessas mulheres. Contudo, a detecção citogenética das mulheres com mutação completa foi menos eficiente do que no caso dos homens, pois 14% de falsos negativos foram observados. A análise de segregação confirmou que o risco de prole afeta- da aumenta com o <FONT FACE="Symbol">D</FONT>, e o risco médio de prole afetada para todas as heterozigotas foi de 30%. Não houve indicação de desvio de segregação nas famílias estudadas, pois o número de indivíduos que herdaram a mutação não diferiu do número daqueles que herdaram os alelos normais. Não foi detectada nenhuma mutação nova nas 55 genealogias investigadas

We report on the cytogenetic and DNA analysis of 55 families with the fragile X (FMR-1 locus) mutation (318 individuals and 15 chorionic villi samples). A total of 129 males were investigated, 54 mentally normal and 75 presenting mental retardation. Among the 54 normal males, 11 had the premutation, and none expressed the fragile site. The full mutation was detected in 73 retarded males, and 14 (18%) presented a premutation along with the full mutation (mosaics). All of them manifested the fragile site. The frequencies of fragile site expression correlated positively with the sizes of the expansion of the CGG repeats (<FONT FACE="Symbol">D</FONT>). Among 153 normal females, 85 were found to be heterozygous for the premutation and 15 had the full mutation. In the premutated females the fragile site was not observed or it occurred at frequencies that did not differ from those observed in 53 noncarriers. Cytogenetic analysis was thus ineffective for the diagnosis of premutated males or females. Among the 51 heterozygotes for the full mutation, 36 (70%) had some degree of mental impairment. As in males, a positive correlation was detected between the frequencies of fragile site manifestation and the size of the expansion. However, the cytogenetic test was less effective for the detection of fully mutated females, than in the case of males, since 14% false negative results were found among females. Segregation analysis confirmed that the risk of mental retardation in the offspring of heterozygotes increases with the length of <FONT FACE="Symbol">D</FONT>. The average observed frequency of mental retardation in the offspring of all heterozygotes was 30%. There was no indication of meiotic drive occurring in female carriers, since the number of individuals who inherited the mutation did not differ from the number of those inheriting the normal allele. No new mutations were detected in the 55 genealogies studied here.

Para o estudo dos aspectos genéticos envolvidos na divisão de trabalho em Melipona quadrifasciata foram construídas colônias de observação contendo apenas operárias jovens originadas de 10 colônias. Em todos comportamentos analisados houve uma grande variação entre as origens, mas somente os comportamentos de construção de células de cria e propolisação apresentaram diferenças significativas entre as origens

Observation colonies containing only young workers from 10 matrix colonies were set up to investigate the genetic aspects involved in task division in Melipona quadrifasciata. Wide variation among origins was observed for all behaviors analyzed, but these differences were significant only for brood cell construction and propolis preparation

Nove isolados de Bipolaris sorokiniana foram inoculados em três cultivares de trigo (suscetível, moderadamente resistente e resistente). Oito dias após a inoculação, os isolados foram recuperados (27 isolados) e os seguintes sistemas isoenzimáticos foram analisados: esterase, fosfatase alcalina, fosfatase ácida, malato desidrogenase e superóxido dismutase. O sistema de esterase foi o mais polimórfico e os isolados recuperados da cultivar suscetível apresentaram a maior variabilidade, indicando que esta cultivar exerce pouca pressão seletiva sobre o patógeno

Nine isolates of Bipolaris sorokiniana were inoculated on three cultivars of wheat plants (susceptible, moderately resistant, resistant). Eight days after the inoculation, the isolates were recovered (27 isolates) and the following isozymatic patterns were analyzed: esterase, alkaline phosphatase, acid phosphatase, malate dehydrogenase, and superoxide dismutase. The esterase system was the most polymorphic, and the isolates recovered from the susceptible cultivar showed the highest variability. This is evidence that this cultivar exerts low selection pressure on the pathogen

Vinte populações de milho foram introduzidas dos Estados Unidos, representando germoplasmas originários de clima temperado e tropical x temperado. As populações e uma testemunha foram avaliadas na área experimental do Departamento de Genética (ESALQ/USP) em experimento em blocos casualizados com duas repetições. Os seguintes caracteres foram avaliados: altura da planta (PH), altura da espiga (EH), número de ramificações do pendão (TB), peso de 100 grãos (KW), comprimento da espiga (EL), diâmetro da espiga (ED), número de grãos por fileira (KR) e número de fileiras de grãos (RN). A variação observada nas médias das populações exóticas para todos os caracteres foi devida à adaptação diferenciada desses genótipos no ambiente estudado. As populações exóticas apresentaram médias superiores à testemunha para peso de 100 grãos, comprimento da espiga e número de grãos por fileira. As populações P-9, P-10, P-12 e P-13 mostraram baixos valores para posição relativa da espiga, sendo consideradas promissoras para reduzir esse índice nas populações locais. P-1 e P-9 são indicadas para diminuir o número de ramificações do pendão. Os coeficientes de correlação fenotípica entre populações foram positivos para todas as combinações, exceto para número de fileiras de grãos com altura da planta, altura da espiga, número de ramificações do pendão e peso de 100 grãos. Algumas populações exóticas apresentaram elevado potencial para contribuir no melhoramento da arquitetura das plantas em populações adaptadas. Foram obtidas predições de médias de 19 compostos, para os oito caracteres, envolvendo as populações exóticas estudadas.

Temperate and temperate x tropical germplasms were introduced into the maize breeding of the Department of Genetics (ESALQ-USP). Twenty populations designated as P-1 to P-20 and a check population were evaluated in a randomized complete block design with two replications at Piracicaba, SP, Brazil. Plots were 2.0 m long, spaced 1.0 m apart, with 10 plants per plot after thinning. The following traits were evaluated: PH, plant height; EH, ear height; TB, tassel branch number; KW, 100 kernels weight; EL, ear length; ED, ear diameter; KR, kernels per row, and RN, number of rows of kernels. The means of the exotic populations showed a variation in performance for all traits. The population means were greater than check means for KW, EL, and KR. Populations P-9, P-10, P-12, and P-13 showed low relative ear placement values (EH/PH index), indicating that these materials could contribute to lower ear placement in local populations. P-1 and P-9 showed a high potential to reduce TB. The phenotypic correlation coefficients among populations were positive for most combinations, except for RN with PH, EH, TB, and KW. Predictions of 19 composite means were obtained for all traits.